當手性色譜柱分離度下降、
柱壓過高等色譜柱異常現象發生時,
才需要使用本方法沖洗
1、一般情況下,使用常規方法沖洗色譜柱;若常規方法無效,則使用特殊方法一沖洗色譜柱;若特殊方法一無效,則使用特殊方法二沖洗色譜柱。
2、沖洗過程中,10μm柱柱壓請勿超過3Mpa,5μm柱柱壓請勿超過6Mpa,3μm柱柱壓請勿超過15Mpa。
3、以下沖洗過程中涉及的流速僅供參考,實際操作中以柱壓不超過以上說明為宜。
4、以下沖洗過程中提到的20倍柱體積,以4.6*150mm規格柱為例,約為30mL。
常規方法:
1、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v),流速0.5ml/min,沖洗20倍柱體積;
2、沖洗結束,驗柱或重復以前的樣品實驗,看是否柱效有提高。
特殊方法一:
1、 用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,沖洗20倍柱體積;
2、逐漸提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;
3、逐漸增加水的比例至90%,即水/甲醇(90/10,v/v);
4、沖洗結束,驗柱或重復以前的樣品實驗,看是否柱效有提高。
特殊方法二:
1、用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,沖洗20倍柱體積;
3、再用酸性流動相,甲醇/三氟乙酸(100/0.1,v/v),0.3ml/min的流速,沖洗20倍柱體積;
4、再用中性流動相甲醇過渡,甲醇100%,0.3ml/min的流速,沖洗20倍柱體積;
5、逐漸增加水的比例到90%,即水/甲醇(90/10,v/v);
6、沖洗結束,驗柱或重復之前的樣品實驗,看是否有提高柱效。
若按以上步驟沖洗手性柱后
手性柱性能依舊沒有提高
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(注:本文轉載自大賽璐公眾號)
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