反相 LC-如何選擇合適的流動相溶劑

用于反相 LC 的流動相可以是純?nèi)軇⒒旌先軇┑慕M合或含有緩沖液和添加劑的溶劑。流動相溶劑充當(dāng)分析物通過固定相的載體，而不影響結(jié)果。實際上有數(shù)百種溶劑可供選擇，這使得確定哪一種適合您的需求變得具有挑戰(zhàn)性。

流動相溶劑特性
幸運(yùn)的是，流動相溶劑的一些特性可以幫助您為反相 LC 分析選擇合適的溶劑。這些特征包括：
1.溶劑純度——在 LC 中選擇作為流動相的溶劑應(yīng)為 HPLC 或 MS 級，應(yīng)進(jìn)行過濾和超聲處理，以確保 UV 光譜中的吸光度zui小且不含氣泡。
2.溶劑粘度- 反相流動相應(yīng)具有zui佳粘度，以幫助確保通過 HPLC 色譜柱固定相的zui佳線速度，從而提供更窄和更尖銳的峰，從而提高分析的整體靈敏度。
3.折光率——這是使用折光率檢測器時的一個關(guān)鍵考慮因素。理想情況下，當(dāng)使用 RI 檢測器時，流動相和樣品稀釋劑應(yīng)具有相似的折射率以避免出現(xiàn)負(fù)峰，換句話說，樣品應(yīng)在流動相中制備。
4.溶劑沸點(diǎn)- zui好選擇沸點(diǎn)低的溶劑以提高回收率，特別是在 LC-MS 中，揮發(fā)性更強(qiáng)的溶劑將改善離子化，從而提高 MS 靈敏度。
5.無腐蝕性——流動相溶劑不得腐蝕流路中的 HPLC 管、泵閥、密封件和其他部件。
6.溶劑毒性– 確保溶劑無毒并且使用穩(wěn)定版。
7.溶劑混溶性——選擇與樣品完全混溶的溶劑。分析物也必須可溶于其中。否則，您將在色譜柱入口篩板處遇到樣品沉淀，從而產(chǎn)生高反壓、基線問題、分析物的不太敏感的峰以及色譜圖中的峰面積和峰形問題。
8.流動相透明度– 選擇以檢測波長傳輸?shù)牧鲃酉唷?/span>
9.洗脫強(qiáng)度——這是溶劑從固定相中洗脫目標(biāo)分析物的能力。洗脫強(qiáng)度越高，溶劑越有效，選擇性越好。流動相溶劑應(yīng)具有zui佳和足夠的洗脫強(qiáng)度，以實現(xiàn)對目標(biāo)分析物的選擇性。

考慮到這些特性，大多數(shù)色譜工作者首要選擇的流動相溶劑是乙腈，因為它具有zui佳粘度、良好的 UV 透明度和足夠的洗脫強(qiáng)度。

其他常見的溶劑包括甲醇，它的粘度比乙腈高（特別是與水混合時）和四氫呋喃，它具有高洗脫強(qiáng)度，但毒性更大并且存在**問題。甲基叔丁基醚可作為四氫呋喃的替代品。

選擇流動相緩沖液和添加劑
除了選擇流動相溶劑外，您還需要選擇合適的緩沖液和/或其他添加劑。緩沖液用于控制流動相的 pH 值。酸性添加劑（pH 為 2 至 4）用于大多數(shù)制藥應(yīng)用，而堿性流動相（pH 大于 8）用于為堿性分析物實現(xiàn)更高的保留和改進(jìn)的峰形。

簡單的流動相是zui好的
為反相 LC選擇更簡單的流動相已成為常態(tài)。這背后的實用性是顯而易見的，隨著色譜柱固定相和色譜柱制造技術(shù)的進(jìn)步以及極其靈敏、高分辨率儀器的可用性，減少了對緩沖液和其他添加劑的需求，而這些需求以前是提供良好色譜所必需的。

例如，傳統(tǒng)上將乙腈與 95% 的水混合以通過確保兩種流動相在粘度和表面張力方面相似來提高混合效率。然而，隨著泵的改進(jìn)和在線混合器的引入，這變得越來越不必要。

除此之外，隨著使用具有線性梯度分布的更簡單的溶劑，方法變得更加穩(wěn)健，并且隨著高分辨率 MS 技術(shù)的快速發(fā)展，它進(jìn)一步減少了 LC 方法中對復(fù)雜流動相的需求。

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