高壓液相色譜法 （HPLC） 是制藥和其他化學(xué)工業(yè)中*常用的技術(shù)之一，用于分離、定性和定量混合物的成分。混合物在高壓下通過(guò)溶劑（稱為流動(dòng)相）通過(guò)色譜柱中的固定相。

在選擇用于 HPLC 的流動(dòng)相時(shí)，選擇的溶劑將取決于分析物與固定相之間所需的相互作用類型。雖然有許多不同的色譜模式，但本文將重點(diǎn)介紹正相和反相色譜。流動(dòng)相通常由兩種不同的組分組成：一種是促進(jìn)分析物在固定相上保留的弱組分，另一種是促進(jìn)分析物從色譜柱中洗脫的強(qiáng)組分。

用于正相色譜的流動(dòng)相

正相 HPLC 的流動(dòng)相弱部分必須是非極性（親脂性）溶劑。這是因?yàn)檎?HPLC 中的分離依賴于分析物對(duì)極性固定相的吸引力。非極性不會(huì)吸引分析物的分子，從而增加分析物在固定相中的保留時(shí)間。當(dāng)需要從色譜柱中洗脫分析物時(shí)，然后使用極性有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相的強(qiáng)部分。

*常用的正相流動(dòng)相溶劑是：

• 己烷
• 庚烷
• 氯仿
• 苯
• 乙酸乙酯二氯甲烷
• 乙醇
• 異丙醇

用于反相色譜的流動(dòng)相

對(duì)于反相 HPLC（*常用的 HPLC 模式）使用的流動(dòng)相，弱溶劑本質(zhì)上必須是極性的，這樣它才能在分析物通過(guò)色譜柱時(shí)幫助排斥或推動(dòng)分析物向非極性疏水性固定相。同樣，結(jié)果是分析物的保留時(shí)間增加。

反相 HPLC *常用的流動(dòng)相是水。將水與有機(jī)改性劑以 0% 至 100% 的比例混合。改性劑可以是乙腈、甲醇或其他極性有機(jī)溶劑。增加有機(jī)改性劑或強(qiáng)溶劑將有助于從色譜柱中洗脫分析物。

溶劑在流動(dòng)相中的混合

由于在 HPLC 流動(dòng)相中很少使用單一溶劑，因此在混合溶劑時(shí)必須考慮以下因素：

• 混溶性 – 混合在一起的溶劑應(yīng)該能夠相互混溶，這意味著一種溶劑需要能夠與另一種溶劑溶解。將不混溶的溶劑一起使用可能會(huì)對(duì)色譜柱造成長(zhǎng)久性損壞。
• 溫度 – 溶劑在混合之前應(yīng)保持相同的溫度。讓他們?cè)趯?shí)驗(yàn)室里坐一會(huì)兒就可以確保這一點(diǎn)。
• 純度 – 溶劑必須為 HPLC 級(jí)或更高等級(jí)，以確保分析具有低背景，并*大限度地減少對(duì)系統(tǒng)的長(zhǎng)期損害。這包括使用的水，這些水應(yīng)該經(jīng)過(guò)反滲透。
• UV cut-off wavelength （紫外線截止波長(zhǎng)） – 可以檢測(cè)溶劑的*低波長(zhǎng)。選擇溶劑時(shí)，必須使其 UV 截止波長(zhǎng)低于分析中的分析物。
• 折光率 – 溶劑混合時(shí)，其折光率應(yīng)與樣品的折光率明顯不同。
• 粘度 – 溶劑應(yīng)具有低粘度，以確保其能夠輕松流過(guò)固定相以實(shí)現(xiàn)有效的傳質(zhì)。粘度較高的溶劑會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)中的背壓升高，這可能會(huì)損壞組件并損壞色譜柱。
• 可壓縮性 – 溶劑的可壓縮性會(huì)影響流動(dòng)相的流速。泵送系統(tǒng)保持流速一致，但所用溶劑的流速應(yīng)盡可能保持一致。